Microscopía de súper resolución (SIM, PALM/STORM) y TIRF

Imágenes

Configuraciones

Estativo

Microscopio invertido ELYRA PS.1 (Carl Zeiss)

Líneas de láser

405 nm, 488 nm, 561 nm, 642 nm

 

 

Cámaras

2 cámaras EMCCD Andor iXion+ de 35 MHz, 31 f/s o 60 f/s en imágenes 2×2 binned

 

 

Objetivos

  • EC Plan-Neofluar 10X / 0.3

  • Plan Apochromat 63X / 1.4 oil DIC

  • Alpha Plan-Apochromat 100X / 1.46 oil DIC VIS

Técnicas de ELYRA PS.1

SR-SIM Super Resolution Structured Illumination Microscopy

Permite la observación de muestras fluorescentes en 3D y multicolor a una resolución de hasta 100 nm en el plano lateral y 350 nm e el plano axial. Las aplicaciones incluyen: estudio de la nanoestructura en membrana, agregación de proteínas, la maquinaria nuclear, arquitectura molecular en la interfaz célula-célula y la transmisión sináptica, etc.

 

Referencias

Superresolution Structured Illumination Microscopy

Introduction to Superresolution Microscopy

 

 

 

SMLM Single Molecule Localización Microscopy

Las técnicas de este tipo son: PALM (Photoactivated Localization Microscopy) y STORM (Stocastic Reconstruction Microscopy). Permiten una resolución lateral de hasta 20 nm formando imágenes a partir de moléculas individuales

Introduction to Photoactivated Localization Microscopy

Practical Aspects of PALM imaging

Practical Aspects of Photoactivated Localization Microscopy

 

 

TIRF  Total Internal Reflection Microscopy

Esta técnica usa una onda evanescente entre el especimen y el cubreobjetos, lo que elimina la señal de fondo fuera del plano focal e incrementa la relación señal/ruido, la resolución espacial y la nitidez de la imágen. Las aplicaciones más comunes invocluran visualización de fenómenos que ocurren en las membranas plasmáticas de células vivas

Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (TIRF)